１日目　メダカの人工受精を行います

メダカを解剖し卵巣と精巣を取り出します。これは赤メダカのメスから卵巣を取り出しているところです。

メダカを氷水で冷やして動かなくなってから双眼実体顕微鏡で見ながら解剖します。シャーレにパラフィンを流した台の上に虫ピンでメダカを固定しｊます。

取り出した卵巣です。メダカ用のリンガー液に入れます。真水に入れると受精能力をすぐに失ってしまいます。

赤メダカ（系統名T5）×赤メダカ　　
赤メダカ×黒メダカ （系統名HNI）
F1（T5とHNIをかけ合わせたもの）×F1
の三つの組み合わせで人工受精させシャーレに入れておきます。 ３０度を超えると良くないので涼しいところにおいておきます。

２日目です　人工受精の結果を調べます。表現型がメンデルの法則通りになるでしょうか。

F1どうしをかけ合わせたF2の表現型を数えました。
黒：ブチ：赤：赤ブチ＝９：３：３：１になるはずです。

実際に数えたのは５５個です。期待値は
黒：ブチ：赤：赤ブチ＝３１：１０：１０：３
実際には　黒：ブチ：赤：赤ブチ＝２５：１４：１３：３
まあまあうまくできたと見て良いでしょう。
分離の法則が確認できました。

黒（黒＋ブチ）：赤（赤＋赤ブチ）＝３８：１７
ブチでない（黒＋赤）：ブチ（ブチ＋赤ブチ）＝３９：１６
微妙な値ですが（理論値は３：１）サンプルが少ないのでよしとしましょう。
独立の法則が確認できました。

赤×赤は全て赤になりました。
赤×黒は全て黒になりました。
優性の法則が確認できました。

サンプルを三つにわけてそれぞれに遺伝子１、２，３を増幅するプライマーと他の試薬を加え、サーマルサイクラーにセットします。

サーマルサイクラーは自動的に働き、数時間で必要なＤＮＡのコピーを大量に作ります。

３日目　PCRを行ったDNAを電気泳動によって調べます

黒のレーンを見るとバンドが上に出ています。この個体が黒遺伝子Bと連鎖しているマーカーを持ちます。T5のレーンを見るとバンドが下に出ています。この個体は赤遺伝子bに連鎖しているマーカーを持ちます。F1のレーンを見るとバンドが上と下の両方に出ています。この個体はヘテロBbと見ることが出来ます。
この遺伝子（遺伝子２）は染色体上で体色遺伝子と少し離れているのでその間で組み換えが起こっている可能性があります。
３の個体の表現型は黒なのでバンドは上のみか上と下に出るはずなのに下にしか出ていません。組み換えが起こったと考えられます。予定では体色遺伝子と連鎖していてすぐ近くに存在するマーカー（遺伝子１）、連鎖しているが少し離れているマーカー（遺伝子２）、連鎖していない無関係のマーカー（遺伝子３）を比較する予定でしたが、遺伝子２しかはっきりバンドが出なかったため、遺伝子型を確定し、さらに組み換え価を計算することは出来ませんでした。

上の結果は４班の遺伝子２（連鎖しているが体色遺伝子と少し離れているので組み換えが起こっている）のものです。

今回の実験のまとめです。